人P物质（SP）ELISA试剂盒-实验类型（夹心法）

人P物质（SP）ELISA试剂盒-实验类型（夹心法）实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P物质（SP）水平。用纯化的人P物质（SP）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人P物质（SP），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人P物质（SP）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人P物质（SP）含量。

操作步骤

• 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
• 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
• 加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
• 温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
• 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
• 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
• 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
• 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
• 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

• 试剂盒性能：

  1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

  2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。

  检测范围：

  3.75 pg/mL-120 pg/mL

  灵敏度：

  低检测浓度小于0.1 pg/mL

  保存条件及有效期：

  1.试剂盒保存：2-8℃。

  2．有效期： 6个月