催产素检测试剂盒（酶联免疫法）ELISA操作原理

催产素检测试剂盒（酶联免疫法）ELISA操作原理

德国进口DRG

【检测原理】

在执行此测定之前，请阅读完整的试剂盒说明书。提供催产素标准品以生成测定的标准曲线，所有样品应从标准曲线中读出。将标准品或稀释的样品加入到包被有抗体的微孔板中，以捕获兔抗体。将催产素-过氧化物酶联物添加到标准品和样品的孔中。通过向每个孔中添加催产素多克隆抗体来启动结合反应。在4°C孵育过夜后，洗涤微孔并添加提供的底物。底物与结合的催产素-过氧化物酶结合物反应。孵育30分钟后，停止反应，并在能够测量450 nm波长的酶标仪中检测所产生颜色的强度。使用大多数酶标仪提供的软件对样品的稀释液进行适当校正后，可以计算出样品中催产素的浓度。

所需但未提供的其他材料

1.蒸馏水或去离子水2.聚丙烯或玻璃管3. Speedvac /离心浓缩器或N2气体和瓦斯集合管进行蒸发4.带有一次性吸头的移液器，例如Eppendorf移液枪，可精确分配25 µL，50 µL和100 µL5.微孔板振荡器6. 450 nm酶标仪7.四参数对数曲线（4PLC）拟合的软件

【储存条件】试剂盒在4°C下可保存至效期结束。

【样本类型】该测定方法已经过血清，EDTA和肝素血浆，唾液，澄清牛奶和组织培养样品的验证。使用前，应将含有可见颗粒物的样品离心。

催产素在所有物种中都是相同的，我们希望该试剂盒可以检测人类以外来源的催产素。由于与鱼神经叶激素和中催产素的交叉反应性，该试剂盒还应能够测量鸟类，鱼类，两栖动物和爬行动物中的鱼神经叶激素。最终用户应评估其他被测样品中催产素的回收率。

【样品制备】血清和血浆样本在试剂盒中检测之前，应使用提供的提取液或固相C18柱提取方案（应要求提供肽/蛋白质提取方案）提取血清和血浆样品。

使用提取液的方案：1.将1份样品与1.5份提取液混合。

2.然后在室温下涡旋振荡90分钟。

3.在4°C下以1660 x g离心20分钟。

4.将上清液转移到透明管中。

5.将上清液在37℃下干燥浓缩。

6.用250 µL分析缓冲液复溶样品。

唾液样本唾液样本应使用血清和血浆样本所述的提取试剂进行提取。唾液应与Sarstedt唾液采集管一起收集，提取，干燥并在250 µL的分析缓冲液中重新配制。

牛奶样本牛奶样品应通过以10,000×g离心15分钟来澄清。刺穿顶部脂肪层并收集上清液。重复离心和收集两次。然后，在用于测定之前，必须使用提供的分析缓冲液将收集的上清液稀释≥1:10。澄清的牛奶样品，即上清液，可以在-20℃下保存直至需要。

在制备后的2小时内使用所有样品

【试剂准备】使所有试剂平衡至室温30分钟。在将其运用于试剂盒之前，请确保所有样品均已达到室温并已适当稀释。

分析缓冲液将一份浓缩液添加到四份去离子水中来稀释分析缓冲液浓缩液1：5。稀释后，可在4°C下稳定3个月。洗涤缓冲液将一部分浓缩液添加到19份去离子水中来稀释洗涤缓冲液浓缩液1:20。稀释后，在室温下稳定3个月。

标准品制备将试管标记为＃1至＃8。吸取450 µL分析缓冲液至＃1试管中，然后吸取300 µL至其余试管中。催产素原液包含有机溶剂。将移液器吸头预冲洗几次，以确保准确递送。小心地将50 µL催产素原液加入1号试管中，并*涡旋。然后再加入200 µL 1号管液至2号试管中并完全涡旋。重复＃3至＃8试管的系列稀释。试管1至8中催产素的浓度将为10,000、4,000、1,600、640、256、102.4、40.96和16.38 pg / mL。