ELISA检测试剂盒常见问题处理
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| 出现问题 |
出现问题的原因 |
解决办法 |
曲线
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OD值不正常
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试剂盒未回温 |
试剂盒回温到25℃ |
| 温度控制不好 |
控制正确温度 |
| 孵育时间不准确 |
控制孵育时间 |
| 洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加 |
洗涤4-5次,每孔250ul,然后拍干 |
| 阳光直射,对着风直接吹 |
避风避光 |
| 酶标仪的波长错误 |
酶标仪的波长450nm |
| 抗体的稀释错误 |
正确的稀释抗体 |
| 水质问题 |
用娃哈哈矿泉水代替 |
白 板
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洗涤液配制错误 |
正确的配制洗涤液 |
| 少加液体(抗体、酶标记物、A液、B液) |
正确的步骤加液体 |
| 错加液体 |
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无 梯 度
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标准品也污染 |
换标准品点板 |
| OD值不正常 |
控制温度时间在做一次 |
| 人为点板 |
/ |
线 性 不 好
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OD值不正常 |
控制温度时间在做一次 |
| 人为点板 |
/ |
回 收 率
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空白管阳性高
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样本本身就是阳性样本 |
换阴性样本做回收率 |
| 空白管在实验中被污染 |
实验中防止交叉污染 |
| 水质原因 |
用娃哈哈矿泉水代替 |
偏 高
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添加量不准确 |
的添加量 |
| 添加浓度不适合 |
添加合适的浓度 |
| 取液吹干量多 |
准确的取液吹干 |
| 取到其它相层液体 |
取需用相吹干 |
| 复溶液未稀释或加入量少 |
正确的稀释复溶液 |
偏 低
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添加量不准确 |
的添加量 |
| 添加浓度不适合 |
添加合适的浓度 |
| 取液吹干量少 |
准确的取液吹干 |
| 复溶液稀释错误或加入量多 |
正确的稀释复溶液 |
假阴、阳性
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水质原因 |
点复溶液验证 |
用娃哈哈矿泉水代替 |
实验操作原因
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吸取到其它相吹干 |
准确的取液吹干 |
| 离心不* |
延长离心时间 |
| 样本的污染 |
更换样本 |
| 乳化未处理* |
温浴(70℃)处理乳化现象 |
仪器试剂原因
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离心管未清洗干净 |
正确的洗涤器具 |
| 有机溶剂的影响 |
做试剂空白看影响结果 |
| 衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质) |
更换衍生化试剂 |
| 与曲线好坏相关 |
保证曲线的正常 |
金标检测(T)线颜色较浅
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尿液pH偏碱性 |
用0.01M HCl调节尿液pH值到7.0左右。 |
| 尿样滴加过多 |
重新测定,尿样按照说明书,控制在2滴 |
| 尿液过于混浊 |
将尿液离心后,取上清液重新测定 |
金标质控(C)线不出现
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检测卡由于高温、受潮等原因失效 |
尿样需要重新检测。 |
| 过了有效期失效。 |
该批号的金标应丢弃处理,尿液需要重新检测
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| 操作过程中检测卡没有平放,导致液体样品直接冲过检测区 |
尿样需要重新检测,且检测卡平放于桌面上再加样。 |
| 尿液样品中含有较高的抑制或者干扰抗原抗体反应的物质(比如明矾、小苏打、氧化剂、肌酐等) |
该尿液的检测结果无效 |
| 金标卡上在除了T和C线之外的其他地方出线 |
金标卡上的划痕;胶体金在跑板过程中没有*跑干净而在卡上的痕迹; |
该检测卡结果不可信,尿液需要重新检测。 |
| 实验重复性不好 |
操作人员的不一致,取样的不一致,样本数量的多少,加样时间的长短,洗涤条件不一致,加样量不一致 |
尽量保持的实验一致性
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分析软件的使用
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不能设置和保存 |
正确的设置和保存 |
| 如何判断曲线的好坏和分析结果 |
正确的判断曲线的好坏和分析结果 |